獲1993年度云南省科技進步三等獎

獲獎者：余文祥  余 蕾  李菊升  李崇珍  李學忠

云南省瘧疾防治研究所

 

自從1975年Kohler和Milstein建立細胞雜交瘤技術以來，單克隆抗體(McAb)，以它極大的優(yōu)勢，在生物學各個領域得到廣泛應用。七十年代末，國外開始生產(chǎn)出各種寄生蟲抗原的McAb，用于寄生蟲抗原的檢測。1982年Zavala等首先報導子孢子McAb 作放射免疫檢測蚊體子孢子抗原獲得成功，后改用ELISA方法， 九十年代初已成功應用于現(xiàn)場，證實是一種快速檢測蚊媒的有效方法，可以極大地提高監(jiān)測媒介按蚊的效率， 對科學地指導蚊媒防除，促進瘧防工作有很大意義。

我們從1989年起開展了抗間日瘧子孢子單克隆抗體的研制工作， 主要以子孢子抗原的制備、小鼠骨髓瘤細胞的培養(yǎng)、BACB/C小鼠的飼養(yǎng)、子孢子抗原片的制備，用子孢子免疫小鼠后提取抗體效價達1:640 之小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞在聚乙二醇作用下進行細胞融合培養(yǎng)。結果在細胞融合后分種的48孔中，26孔有雜交瘤細胞生長，融合率為54%。用雜交瘤細胞培養(yǎng)上清進行抗體檢測，有15孔呈陽性反應，占58%。采用IFA 方法篩選陰性孔，經(jīng)有限稀釋法克隆5次，建立了8株分泌抗子孢子單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其培養(yǎng)上清抗體(IFA)效價為1:4，擴大培養(yǎng)后注入同系小鼠腹腔誘生的腹水， 抗體效價為1:40。并對隨機抽取的52D11-D10株經(jīng)(NH4)₂SO₄)沉淀后4℃存4個月)進行鑒定，經(jīng)過Protein-A親和層析后，收集物蛋白含量0.263mg/ml；2gG類別： 用小鼠IgG、IgM、IgA作雙擴試驗，結果只在IgG之間出現(xiàn)免疫沉淀線；純度：用SDS-PHGE 作凝膠電泳，只有單一的IgG重、輕鏈區(qū)帶。免疫效價：作瓊脂雙擴試驗， 終點滴度達1:64(一般MCAb1:4即為陽性)。特異性：用Pf、PC、PV子孢子作成抗原片，同時作IFA試驗，結果只有子孢子呈陽性反應。細胞學檢測：所培養(yǎng)得到的8株陽性雜交瘤細胞， 都經(jīng)過雜色體檢查，結果平均染色體數(shù)目為80-110條，(瘤細胞染色體數(shù)目平均72條)。以上數(shù)據(jù)證實，被檢的52D11-D10株分泌的蛋白，確實是抗間日瘧子孢子單克隆抗體。

蚊媒子孢子自然感染調查，傳統(tǒng)的方法是靠單個蚊蟲唾腺解剖來確定，技術要求高， 而且費時費力，檢出率低，對整個媒介檢測受到限制， 子孢子單克隆抗體的研制成功可替?zhèn)鹘y(tǒng)的解剖唾腺方法，為提高疫情監(jiān)測水平，指導按蚊防除， 完善現(xiàn)有抗瘧措施，探索瘧疾自動免疫療法，開辟了廣闊前景。

 

執(zhí)筆整理：李菊升

 

注：轉載請注明出處，謝謝合作