獲1985年度云南省衛(wèi)生廳科技進步三等獎

獲獎者：金淑仙  楊品芳  李菊升  胡惠仙

云南省瘧疾防治研究所

 

隨著滅瘧運動的開展，各種抗瘧藥物的大規(guī)模應用，瘧疾流行的圖像起了復雜的變化。傳統(tǒng)的瘧疾流行病學調(diào)查方法（發(fā)病率、脾腫率、原蟲率等）已不足及時、準確地反映各地流行的性質(zhì)。世界衛(wèi)生組織（WHO）在總結不少地區(qū)和國家在消滅或控制瘧疾后，又重新受到瘧疾的侵襲這一教訓時提出，重要的因素之一是由于缺乏一種靈敏的監(jiān)測系統(tǒng)。我省瘧疾防治工作經(jīng)過多年的努力， 大多數(shù)地區(qū)的瘧疾流行得到了有效控制，至84年止，全省54個縣發(fā)病率在1/萬以下，22個縣為1-5/萬， 在瘧疾處于低水平傳播的這類地區(qū)應用一靈敏的監(jiān)測系統(tǒng)尤為重要，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測抗體具有較高的特異性和靈敏性，這在其它領域的研究與應用中已得到證實，但該法在瘧疾流行病學調(diào)查中國內(nèi)甚少應用。為了進一步研究ELISA 在瘧疾現(xiàn)場調(diào)查中的價值，盡快應用該法作為瘧疾監(jiān)測的工具。我們按WHO介紹的ELISA間接法對瘧疾現(xiàn)癥病人，無瘧疾流行區(qū)的健康兒童，人工感染間日瘧經(jīng)根治后7─15 個月的志愿受試者及瘧疾流行區(qū)，控制暴發(fā)后兩年的地區(qū)；基本消滅瘧疾的地區(qū)中的人群進行測試。在試驗中所用抗原，結合物為本所自制，樣本均采用直徑為1.2cm的濾紙干血滴。ELISA間接法采用辣根過氧化物酶，OPD、H₂O系統(tǒng)，使用DG3021酶聯(lián)檢測儀( 南京華東電子管廠)波長選擇490nm，陽性間值的測定用經(jīng)鏡檢證實為瘧疾現(xiàn)癥病人及無瘧疾流行的思茅地區(qū)健康兒童的血滴，選擇兩者間界限較明顯的OD值作為陽性間值。目測法以已知濃度的OPD顯色液為標準比色液，其濃度的選擇是根據(jù)預試驗中光電比色法對已知陽性及陰性血滴的測試，確定OD 0.4為陽性閾值后，從一系列濃度的OPD顯色液中，選出其OD亦為0.4及＜0.4的兩個較適宜濃度為標準比色液。在判斷結果時，凡反應液顏色與陰性標準液相同或更淺者，判為陰性與陽性標準液相同或更深者，判為陽性。在全部樣本測試中，均先目測后再行光電比色。[NextPage]

在結果判定中，用自行設計的已知濃度的OPD顯色液作目測法的標準比色液，在1018人的ELISA結果判讀中，兩種比色法陽性符合率為96.67%；陰性符合率為95.49%。在用兩種比色法對瘧疾流行區(qū)居民抗體水平測試中陽性GMRT目測法334.76；光電比色法386.39。兩均數(shù)無顯著差異(P＞0.05)。表明目測法同樣能準確地反映出人群中受感染瘧疾的程度，是一種簡易經(jīng)濟、準確、適宜于基層推廣應用的方法。2、對三種不同程度瘧疾流行區(qū)的調(diào)查結果，瘧疾流行地區(qū)的原蟲率19.02%，抗體陽性率97.93%，隨著年齡的增長，抗體水平呈直線上升，控制暴發(fā)流行兩年及基本消滅瘧疾的地區(qū)，原蟲率分別為0.47%及0，抗體陽性率分別為6.98%、0.48% 。結果顯示應用ELISA能客觀地反映出不同地區(qū)的瘧疾流行水平，人群抗體水平與防治措施之間的關系。表明此法可應用于瘧疾現(xiàn)場調(diào)查中，這對于準確地了解各地區(qū)瘧疾流行動態(tài)，作為指導制訂防治措施的參考指標，考核防治效果將起到重要的作用。3、測定26例人工感染間日瘧志愿受試者經(jīng)根治后7 ─15 個月的抗體水平， 結果均為陰性。提示ELISA陽性者可反映半年內(nèi)感染過瘧疾或近年內(nèi)感染過瘧疾而未得到徹底治療。

通過用兩種方法的比較顯示兩者都具有同樣的準確性，目測法不需專用分光光度計，不受實驗室條件限制，適宜于設備較差的基層使用，為我省在瘧疾防治工作中廣泛應用ELISA這一高靈敏度，高特異性的新技術開拓了新的前景。

 

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