獲云南省衛(wèi)生廳1983年成果推廣三等獎(jiǎng)

獲得者：李學(xué)忠  余文祥  金淑仙  楊品芳

云南省瘧疾防治研究所

應(yīng)用間接熒光抗體試驗(yàn)進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查，是近十多年來(lái)興起的一項(xiàng)新技術(shù)。通過(guò)多年來(lái)各地應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)證明，本法可以在瘧疾防治后期，人群帶蟲(chóng)率及帶蟲(chóng)密度均下降到很低的水平。用傳統(tǒng)的鏡檢方法其靈敏性已不適應(yīng)這一階段的需要時(shí)，應(yīng)用血清學(xué)的方法可以幫助查出可疑的傳染源；用以測(cè)定不同瘧區(qū)流行的水平或傳播強(qiáng)度；評(píng)價(jià)防治措施的效果；還可以通過(guò)連續(xù)調(diào)查監(jiān)測(cè)瘧疾流行的動(dòng)態(tài)。

為適應(yīng)我省現(xiàn)階段瘧疾防治工作的需要，自1978年以來(lái)，在全省各重點(diǎn)瘧區(qū)縣逐步推廣應(yīng)用間接熒光抗體試驗(yàn)。但此項(xiàng)試驗(yàn)的主要材料，動(dòng)物抗人IgG熒光抗體和食蟹猴瘧原蟲(chóng)抗原片需從省外購(gòu)買。不僅來(lái)源困難，且經(jīng)長(zhǎng)途運(yùn)輸使抗原抗體活性受到不同程度的影響。為解決我省廣大瘧區(qū)擴(kuò)大應(yīng)用這一項(xiàng)新技術(shù)，我們從生產(chǎn)主要試劑、培訓(xùn)技術(shù)干部，以及應(yīng)用等方面進(jìn)行了工作，現(xiàn)將推廣過(guò)程中的情況小結(jié)如下：

材料和方法

2             試劑生產(chǎn)：

    1、包括人IgG抗人IgG的制備，采用常規(guī)的飽和硫酸銨沉淀法粗提丙球后過(guò)DEAE陰離子交換劑提純，用紫外光吸收法測(cè)定含量，以聚丙烯酰胺凝膠電泳或醋酸纖維膜電泳測(cè)定純度，用攪拌法進(jìn)行標(biāo)記；

    2、抗原片生產(chǎn)，國(guó)內(nèi)尚無(wú)商品供應(yīng)，為保證我省開(kāi)展此方法作為監(jiān)測(cè)手段，按北方五省熒光抗體試驗(yàn)常規(guī)的技術(shù)規(guī)程批量生產(chǎn)P.cynomolgi洗滌抗原片。

    以上試劑均按常規(guī)進(jìn)行質(zhì)量鑒定，并與上海生物制品研究所同年生產(chǎn)的同類產(chǎn)品進(jìn)行比較。

二、技術(shù)推廣措施：

1         舉辦培訓(xùn)班；

2         接收進(jìn)修；

3         本所開(kāi)展應(yīng)用方面的研究總結(jié)經(jīng)驗(yàn)加以推廣。

三、各地在應(yīng)用中逐步提高使用水平

結(jié)果和討論

間接熒光抗體試驗(yàn)(IFAT)是一項(xiàng)靈敏性高的免疫診斷方法，已為國(guó)內(nèi)外普遍使用。欲在全省范圍內(nèi)推廣，首先要解決主要試劑和設(shè)備的供應(yīng)以及技術(shù)的掌握和應(yīng)用兩個(gè)主要問(wèn)題。由于省外購(gòu)買熒光抗體較為困難及抗原片國(guó)內(nèi)尚無(wú)商品供應(yīng)，為此，我們?cè)谑?nèi)首次開(kāi)始生產(chǎn)這兩種試劑，經(jīng)鑒定每批生產(chǎn)的IgG 含量均在20mg/ml以上。抗人IgG免疫療程滿后，用環(huán)狀沉淀試驗(yàn)及雙向擴(kuò)散法測(cè)定效價(jià)，均在1：128時(shí)才放血制備，與上海生物研究所同年同類產(chǎn)品比較，達(dá)到同類產(chǎn)品的質(zhì)量。

另外洗滌抗原片每次制備完畢，均用參考陽(yáng)性血清及陰性血清測(cè)試，無(wú)假陽(yáng)性及假陰性反應(yīng)。[NextPage]

一、為了推廣這一試驗(yàn)，自1979年以來(lái)先后舉辦訓(xùn)練班四次，培訓(xùn)了200余人，并先后接受來(lái)所專門進(jìn)修這項(xiàng)技術(shù)的有100余人。另外如德宏州、保山地區(qū)、文山州、 臨滄、思茅、西雙版納、楚雄、玉溪、昭通以及曲靖等地、州的30余個(gè)瘧區(qū)重點(diǎn)縣先后不同程度地開(kāi)展了該項(xiàng)試驗(yàn)。

二、通過(guò)培訓(xùn)，我所及各地在現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用中，積累了一定經(jīng)驗(yàn)，得到大量數(shù)據(jù)，對(duì)調(diào)查和指導(dǎo)防治以及考核等方面，起到了積極作用，表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：

1、對(duì)評(píng)價(jià)防治效果，監(jiān)測(cè)瘧疾動(dòng)態(tài)方面起到了積極作用：如昭通地區(qū)1982年6至11月在綏江縣結(jié)合傳統(tǒng)的瘧疾調(diào)查方法進(jìn)行分層調(diào)查同時(shí)作了2600余人的IFA試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)瘧疾實(shí)際流行量遠(yuǎn)大于疫情報(bào)告的發(fā)病率，并通過(guò)與傳統(tǒng)的瘧疾流行病學(xué)調(diào)查相繼結(jié)合分析，證實(shí)當(dāng)?shù)厝杂行赂腥敬嬖冢懠矀鞑ピ诋?dāng)時(shí)防治措施的壓力下受到一定程度的阻滯，并預(yù)測(cè)如果放松措施，3至5內(nèi)年將會(huì)引起瘧疾回升，1984年該縣發(fā)病回升證實(shí)了這一預(yù)測(cè)。玉溪地區(qū)于1982年在峨山、易門、華寧3個(gè)縣的重點(diǎn)瘧區(qū)考核防治效果，用傳統(tǒng)的血檢共查1552人，鏡檢全部陰性，同時(shí)所查的1552人的間接熒光抗體試驗(yàn)，抗體陽(yáng)性32人，陽(yáng)性率為2.06%，但全部均在1：40以下，進(jìn)一步證實(shí)防治效果的質(zhì)量是好的。保山縣1981年流行季節(jié)前、后對(duì)7個(gè)公社18個(gè)生產(chǎn)隊(duì)1個(gè)農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行兩次調(diào)查，第一次查2072人，抗體陽(yáng)性率下降為1.4%，證實(shí)防治措施是落實(shí)的，對(duì)滅瘧進(jìn)入后期的地區(qū)、原蟲(chóng)率極低的情況下應(yīng)用IFAT是可以增加監(jiān)測(cè)的靈敏度。

2、作為清查病灶點(diǎn)是一項(xiàng)有用的輔助方法：我所于1978年在勐?？h進(jìn)行瘧疾防治效果考核中涂血片鏡檢26000余人份，占全縣總?cè)丝跀?shù)的9%左右，發(fā)現(xiàn)35例帶蟲(chóng)者，但由于涂血人數(shù)多，鏡檢人員水平參差不一，加之制片、保存、染色等環(huán)節(jié)的影響、錯(cuò)漏難免，通過(guò)其中1000余人份的IFA試驗(yàn)，就在原血未檢查到原蟲(chóng)的村寨中發(fā)現(xiàn)高滴度陽(yáng)性患者，經(jīng)再次采血鏡檢發(fā)出了帶蟲(chóng)者，彌補(bǔ)了鏡檢漏檢的不足。臨滄地區(qū)1982年在全區(qū)4個(gè)重點(diǎn)縣的23個(gè)點(diǎn)進(jìn)行調(diào)查，共檢2397人，如僅以當(dāng)時(shí)的原蟲(chóng)率為0.38%推算分析，可以認(rèn)為這些點(diǎn)瘧疾流行不嚴(yán)重，但是結(jié)合血清學(xué)方法調(diào)查，抗體陽(yáng)性率為4.21%，而且不少村點(diǎn)陽(yáng)性率仍高達(dá)30%以上并有高滴度陽(yáng)性的患者存在，從而判斷了這些點(diǎn)是病灶點(diǎn)，并及時(shí)采取措施消除了隱患。西雙版納勐臘縣對(duì)一些外地遷入的新居民點(diǎn)發(fā)生暴發(fā)流行經(jīng)控制后進(jìn)行效果考核，調(diào)查當(dāng)時(shí)原蟲(chóng)率0.1%以下，但IFA試驗(yàn)抗體陽(yáng)性率高達(dá)70%，陽(yáng)性GMRT在1：40以上，高滴度陽(yáng)性仍占相當(dāng)比例，連續(xù)調(diào)查結(jié)果，流行季節(jié)后抗體水平較流行前升高，證實(shí)當(dāng)?shù)亓餍腥晕辞袛啵餍袟l件繼續(xù)存在，這一結(jié)果表明在藥物作用下血中原蟲(chóng)暫時(shí)隱匿，IFA試驗(yàn)可以較靈敏地反應(yīng)流行的情況，增加了判斷防治效果和當(dāng)時(shí)流行的情況敏感性。普洱縣1983年對(duì)413例發(fā)熱病人在進(jìn)行病原學(xué)檢查的同時(shí)作IFA試驗(yàn)，其中在流動(dòng)人群40人中IFA陽(yáng)性27人，陽(yáng)性GMRT達(dá)84.21%，而非流行人群313人中僅有陽(yáng)性12人，GMRT為28.28%，并對(duì)這413例發(fā)熱病人用原蟲(chóng)鏡檢，間接熒光抗體試驗(yàn)，臨床診斷三種方法所得數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，結(jié)果表明IFA試驗(yàn)結(jié)合病原學(xué)檢查及臨床診斷，更能最大限度地發(fā)現(xiàn)發(fā)熱病人中的瘧疾患者。

3、積累了不同種瘧疾患者以及不同類型瘧區(qū)已經(jīng)防治后抗體變化的規(guī)律，為防治提供了較可靠的依據(jù)：1979年我所對(duì)22例惡性瘧患者經(jīng)根治連續(xù)追蹤觀察一年，提出惡性瘧根治后抗體消失的規(guī)律是：發(fā)病時(shí)抗體陽(yáng)性率為95.4%(最高1：2500，最低1：40)，根治后抗體水平迅速下降，尤以120—150天下降幅度最大，至210—240天陰轉(zhuǎn)13例（61.9%），其余雖仍保持陽(yáng)性，但滴度均在1：40以下。1984年先后對(duì)42例志愿受試者接種了間日瘧，從接種前，原蟲(chóng)出現(xiàn)前期，癥狀發(fā)作時(shí)以及根治后不同時(shí)間或在復(fù)發(fā)時(shí)只給予一次氯喹標(biāo)準(zhǔn)療程后在各次復(fù)發(fā)時(shí)進(jìn)行血檢和平行作IFA試驗(yàn)，結(jié)果接種原蟲(chóng)至原蟲(chóng)出現(xiàn)前期，37例中有18例出現(xiàn)抗體（48%），根治后抗體迅速下降，第2月起陽(yáng)性率由發(fā)作時(shí)的93.3%降至85.3%，至第7個(gè)月抗體消失。不根治組，凡復(fù)發(fā)病例在癥狀發(fā)作時(shí)抗體已升至相當(dāng)高度，絕大多數(shù)均在1：80以上。

我所于1979年對(duì)一個(gè)以惡性瘧為主（占陽(yáng)性數(shù)95%）的暴發(fā)流行點(diǎn)進(jìn)行了縱向觀察，歷時(shí)16個(gè)月，暴發(fā)時(shí)原蟲(chóng)率59.6%抗體陽(yáng)性率90.6%，陽(yáng)性GMRT為1：232半年后原蟲(chóng)率降至2.8%，抗體陽(yáng)性降至14.8%，陽(yáng)性GMRT降至54.9，一年后原蟲(chóng)降至0，但抗體陽(yáng)性率仍保持17.5%，陽(yáng)性GMRT為41.1，高滴度患者仍占一定比例，該項(xiàng)試驗(yàn)可出用IFA作監(jiān)測(cè)比單用原蟲(chóng)率更為靈敏，同時(shí)也證實(shí)居民帶蟲(chóng)率與居民抗體水平有一定關(guān)系，隨居民帶蟲(chóng)率下降抗體水平及抗體陽(yáng)性率亦下降。

至今年為止，五年來(lái)我所已供應(yīng)各抗原片約4萬(wàn)余張，抗人IgG熒光抗體500余瓶，保證了我省近年來(lái)開(kāi)展約10萬(wàn)人次的調(diào)查，使在瘧疾流行病學(xué)調(diào)查、考核防治效果、清查病灶點(diǎn)、監(jiān)測(cè)瘧疾動(dòng)態(tài)等方面積累了大量數(shù)據(jù)，對(duì)指導(dǎo)今后防治、更深入普及使用這一診斷技術(shù)奠定了良好基礎(chǔ)。

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